Получение мезенхимальных стромальных клеток (МСК) человека с гиперэкспрессией фактора роста эндотелия сосудов VEGF в результате генетической модификации и культивирования клеток в виде 3D сфероидов

Партнеры проекта
Актуальность

В настоящее время существует большая проблема с выживаемостью людей с критической ишемией нижних конечностей. На данный момент, возможно лишь проведение операции по реваскуляризации, но к сожалению она доступна только 70 % пациентов с КИНК.
Мы предлагаем использовать мезенхимальные стромальные клетки для борьбы с ишемией нижних конечностей. С помощью МСК мы можем выработать фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), который в свою очередь осуществит естественную реваскуляризацию.
Проблема
Низкая эффектиность синтеза фактора роста эндотелия сосудов в мезенхимальных стромальных клетках
Гипотезы
  • Можно повысить эффективность экспрессию VEGF, используя сфероиды
  • Можно достигнуть более высокой производительности клеток, пользуясь методом химической трансфекции
НАШЕ РЕШЕНИЕ
Для повышения эффективности мы использовали метод образования 3D структур клеток, а также трансфекцию
Далее будут описаны особенности методов и результаты нашего исследования
Сфероиды МСК
Одним из использованных нами методов повышения терапевтической эффективности стало образование 3D структур клеток - сфероидов.
В сфероиде есть особенная зона - гипоксическое ядро, повышающее экспрессию VEGF культурой клеток МСК
На фото можно увидеть фото сфероида, сделанное с помощью конфокального микроскопа.
Трансфекция
Для внесения в клетку нуклеиновой кислоты, мы использовали липофекцию
Для этого мы использовали реактив GenJect
Ниже представлена общая схема методов химической трансфекции
Итоги нашего исследования
На фото вам представлены результаты иммуноферментного анализа
Можно увидеть, что трансфекция - лучший метод повышения терапевтической эффективности МСК
Наиболее выгодными для трансфекции условиями оказалось разведение ДНК и реактива для трафекции в соотношении 3 : 3
Для подведения итогов мы провели ИФА
Планы развития
Проведение доклинических испытаний и поиск способ введения
Исследование возможности образование сфероидов трансфицированными клетками
Наша команда
  • Дыдышко Софья
    Орловская обл., г. Орёл
  • Сташ Рената
    Республика Адыгея, г. Майкоп
  • Черноусова Вероника
    Ставропольский край, г. Ставрополь
  • Чекмарёв Игорь
    г. Москва
  • Бутаков Михаил
    Тюменская обл., г. Ишим
  • Мирзаева Сабина
    г. Москва
    Стажёр
Наши контакты
Бутаков Михаил
misha.but.06@gmail.com
Чекмарёв Игорь
idchekmarev@mail.ru
Сташ Рената
renatastash@mail.ru
Черноусова Вероника
veranika.chernousova@yandex.ru
Дыдышко Софья
sophie.0701_1982@mail.ru
Леонов Вячеслав Сергеевич
Leonov@ibcgenerium.ru