Применение метода CRISPR/Cas9 для выключения гена Siah1 в клетках HEK (как этап получения трансгенных лабораторных животных)
p.s. самый лучший, если что :)
при поддержке ОЦ "Сириус" и НИЦ "Курчатовский институт"
Существует эффективная технология трансгенеза CRISPR/Cas9.
1.Главная наша задача : знакомство и освоение этого метода.
2.Практическая часть у проекта заключается в получении линии трансгенных клеток HEK с выключенным геном Siah1.
3.Мы выполним процедуру, схожую с этапами методики получения трансгенных лабораторных животных.
Практическая цель : Применение CRISPR/Cas9 технологий для получения трансгенной линии клеток
Задачи :
•Проведение экспериментов с плазмидами
pSpCas9(BB)-2A-GFP и pSpCas9(BB)-2A-Puro
для получения трансгенной линии клеток HEK с выключенным геном Siah1 методом CRISPR/Cas9 :
•подбор gRNA
•отжиг олигов и вставка полученного дуплекса в рестрицированные плазмиды
•трансформация E. coli и наработка плазмид
•трансфекция клеток HEK и анализ полученных клонов
в сфере биологии, а также получишь возможность
выиграть специальные призы !
- Первый этап. Проведение рестрикции плазмид (разрезание плазмид) для последующей вставки в них олиго-дуплекс, соответствующий последовательности гидовой РНК.
- Второй этап. Проведение электрофореза для того, чтобы убедиться, что рестрикция прошла успешно.
- Третий этап. Выделение плазмид из геля после электрофореза и проведение лигирования.
- Четвёртый этап. Трансформация полученных плазмид в E. Coli, благодаря которым мы сможем увеличить кол-во наших плазмид.
- Пятый этап. Отбор колоний, в которых успешно "прижились" наши плазмиды. Анализ вставки гидовой РНК в плазмиды (ПЦР-тест колоний E. Coli). А также рестрикционный анализ.
- Шестой этап. Трансфекция плазмид в клетки HEK293, которые и являются нашим конечным продуктом.
- Седьмой этап. Отбор клеток, в которых прошла трансфекция обеих плазмид.
- Несомненно, раз мы работаем с генами, то наше название должно это отражать, так появилось первое "Ge" - Gene
- Наш проект является лишь первым шагом на пути к другому, более крупному проекту наших преподавателей. То-есть можно назвать наш проект некой точкой, откуда "произойдёт" проект наших обожаемых педагогов. Так появилось второе "Ge" - Genesis
- Ну, вариантов особо не было, подобрали что-то случайно, а потом придумали умное обоснование :)
- ВладимирКакой-то непонятный человек, жаждущий кофеЭто он сайты делал
- ВладимирТоп №1 игрок на Сяо в командеЕсли бы не этот человек, никто бы никогда в жизни не получил бы печать мышку
- БагратМесси из АбхазииЭтот человек на личном опыте знает насколько прочные стекла в Сириусе
- ЕгорСтрекозаКонтрит все всё и вся (кроме Льва)
- ВероникаЭксперт в сфере ПЦРЕдинственный человек, кроме преподавателей, у кого успешно получился ПЦР с первого раза
- ЕлизаветаСпециалист наследованияРешит любую задачу по генетике из ЕГЭ по биологии
ИБО ПЕРЕД ВАМИ ОНИ !
ПРЕПОДАВАТЕЛИ, КОЛЛЕГИ, ТОВАРИЩИ И ДРУЗЬЯ
так, ладно, а то ещё расплачетесь :)
- КристинаПсихолог со знанием тюремного жаргона :)Крис, ты хоть и уехала ближе к концу смены, но твой вклад ничуть не меньше (может даже где-то больше ;) ). Вся команда передаёт тебе большой привет !
- ЛевИмператор всея лаборатории :)Если вы до сих пор не знаете кто это, то я не знаю что вы делали всю смену. Быстрее бегите к нам узнавать про него информацию. AVE LEV !
- ЕкатеринаЧеловек, у которого есть запасной план, на каждый запасной планНу... 99.9 % работы в лаборатории проходили под руководством Кати, так что можно назвать её ЗамИмператором лаборатории :)
Usakin_LA@nrcki.ru
konkurs@sochisirius.ru