Мультиплексная ПЦР
Мультиплексная ПЦР — это модификация полимеразной цепной реакции, которая позволяет одновременно выявлять несколько разных ДНК мишеней в одной пробирке. Вместо одной пары праймеров, в реакционную смесь добавляют сразу несколько, что кратно ускоряет диагностику, экономит биоматериал и реагенты.
Состав смеси
В одну пробирку с биологическим материалом добавляют ферменты, нуклеотиды и сразу несколько наборов праймеров, а также флуоресцентные метки разного типа.
Многократное копирование
Во время термоциклирования каждый праймер находит только «свой» специфический участок генетического кода и запускает процесс его копирования (амплификации)
Детекция
Амплификатор Real-Team в режиме реального времени (ПЦР-РВ) или после завершения считывает результаты. Поскольку каждый праймер помечен своим цветом свечения, оборудование безошибочно определяет, какие именно патогены присутствуют в образце.
Преимущества Мультиплексной ПЦР
  • Высокая скорость
    Выявляет десятки патогенов за один запуск вместо последовательного проведения множества отдельных тестов.
  • Экономия биоматериала
    Для анализа большого числа генов или вирусов достаточно минимального объема образца (одной капли крови или одного мазка).

  • Снижение стоимости
    Сокращает расход дорогих ферментов, пластиковой посуды и рабочее время лабораторного персонала.
  • Меньше риска ошибок
    Единый цикл подготовки образца снижает вероятность случайного загрязнения (контаминации) или человеческого фактора.
С помощью метода TaqMan ПЦР была проведена проверка идентификации бактериальных инфекций. График амплификации показывает работу трех выбранных нами зондов. Судя по графику мы можем сказать, что зонд FAM работает с праймером nuc, ROX работает с праймером NDM. Зонд HEX не вышел, а значит он не сработал с праймером HPD.
Глядя на результаты, можно сказать что теоретическая длина образца совпала с полученными в ходе эксперимента бендами. Полученные результаты говорят о том, что праймеры работают исправно, но в перспективе необходимо подобрать к этим участкам другие зонды, так как по длине продуктов их определение проблематично.
Вторая группа праймеров на антибиотикорезистентность отжигалась без зондов, при 55 градусах. На дорожке 13 приведены продукты реакции с 4 парами праймеров: мы видим все ожидаемые бенды, несмотря на присутствие неспецифичных продуктов. Для того, чтобы улучшить результат идентификации в этой системе в перспективе также лучше подобрать праймеры.