Этап 01 / 04 Выделение ДНК
Первый и ключевой этап: из биологического образца выделяют чистую ДНК. Лизис клеток, очистка на колонках, элюция.
~30 мин
Время
≥3
Эппендорфа
Разработка тест-систем для индентификации бактериальных патогенов, вызывающие осложнения при вирусных заболеваниях
Актуальность
Устойчивость к противомикробным препаратам (УПП) является одной из 10 основных глобальных угроз здоровью, подрывая эффективность основных методов лечения и подвергая миллионы людей риску неизлечимых инфекций. Странам, стремящимся укрепить свои системы здравоохранения и ускорить прогресс в достижении целей всеобщего охвата услугами здравоохранения и безопасности здоровья, необходимы надежные, репрезентативные и своевременные данные об УПП.
*Прикольное видео с ДНК
Создание тест-систем для идентификации бактериальных патогенов, вызывающих осложнения при вирусных инфекциях.
С помощью тест-систем на основе ПЦР и LAMP можно эффективно определить бактериальные патогены, осложняющие вирусные инфекции, а также эффективно подобрать стратегию лечения.
ГИПОТЕЗА
Подобрать оптимальные условия проведения LAMP для определения бактериальных патогенов.
Подобрать праймеры и условия для проведения мультиплексной ПЦР для определения бактериальных патогенов и их антибиотикорезистентности.
Подобрать праймеры для положительного контроля выделения.
2
1
3
ЗАДАЧИ
ЦЕЛЬ
4 этапа создания тест-системы
Автопролистывание · тапните для паузы
⏸
Этап 01 / 04 
Этап 02 / 04 Постановка ПЦР
Подготовка реакционной смеси: праймеры, ДНК-полимераза, дНТФ, буфер. Денатурация, отжиг, элонгация в повторяющихся циклах термоциклера.
~1,5 ч
Цикл
35×
Циклов
95°C
Т плавл.
Этап 03 / 04 Мультиплексная ПЦР
В одной пробирке одновременно амплифицируются несколько мишеней.
3
Бактерии
8
Генов антибиотикорезистентности
Этап 04 / 04 LAMP система
Изотермическая амплификация при 60–65 °C без термоциклера. Шесть праймеров узнают 8 участков ДНК. Результат за 30 минут — идеально для point-of-care.
30 мин
Амплиф.
62°C
Изотерма
6×
Праймеры
‹
›
Интересные факты
КЛИКНИ НА МЕНЯ
ФАКТ 1
Было закапано аж *барабанная дробь* 89 карманов в агарозный гель
Было использовано аж 247 мкл лишних реактивов
ФАКТ 2
Это примерно 1/1000 вот этого стакана (присмотритетсь, там, на донышке)
ФАКТ 3
МЫ ДЕЛАЛИ ЭТОТ ПРОЕКТ 83 ЧАСА!
ЗА ЭТО ВРЕМЯ МОЖНО ДОЛЕТЕТЬ ДО ЛУНЫ НА АПОЛЛОНЕ-11
ЗА ЭТО ВРЕМЯ МОЖНО ДОЛЕТЕТЬ ДО ЛУНЫ НА АПОЛЛОНЕ-11
ФАКТ 4
Нам пришлось целых 69 раз отвлекаться на кормление между работой над проектом.
За это время мозг каждого участника сжег примерно 12 кг глюкозы!
выделение днк
ПЦР
LAMP
Электрофорез
Наша команда
- Алексашин Кириллг. Москва, создатель сайта,
тг: @Ka989gold - Алешина Полинаг. Брянск, разработчик сайта, пцрщик, мемщик,
тг: @Apm_2701 - Кравченко ПолинаРесп. Казахстан, г. Усть-Каменогорск, пцрщик, электрофорезник, тг: @qeiinly
- Калистратова Дианаг. Томск, пцрщик, тг: @dia_kali
- Руденко Майя Викторияг. Калуга, главный электрофорезник, специалист по взятию мазков, тг: @maayrrrr
- Суханова Алисаг. Москва, подкидыватель идей, мемщик,
тг: @alice34568
Наши руководители
"инфлюенса энд гапдаш"
- Мартюшова Владислава ГеннадьевнаРуководитель проекта
- Мартюшова Алиса ГеннадьевнаРуководитель проекта
- Васютенко Олеся АнатольевнаСтажер проекта
Ответы на часто задаваемые вопросы
При идентификации бактерий метод ПЦР работает как молекулярный сканер штрихкодов. Специальные ДНК-праймеры содержат уникальный код, который подходит только к определенному виду бактерии (например, к стафилококку). Если этот патоген есть в образце, праймеры намертво прикрепляются к его ДНК и запускают многократное копирование этого участка. В результате прибор фиксирует размноженный фрагмент, что позволяет врачам со 100%-й точностью назвать конкретный вид бактерии-вредителя.
LAMP использует сразу от 4 до 6 специальных праймеров, которые одновременно распознают до 8 разных участков ДНК патогена. Такой сложный набор молекулярных «меток» заставляет ДНК складываться в петли, обеспечивая сверхбыстрое копирование при одной температуре. Благодаря этому метод обладает максимальной точностью и никогда не ошибается при поиске нужной бактерии.
Наша тест-система нужна для того, чтобы врачи могли быстрее идентифицировать вторичные заболевания ( — это патологии или осложнения, которые развиваются как следствие другого, уже имеющегося первичного заболевания. Чаще всего они возникают на фоне ослабленного иммунитета) и также быстро выяснять к каким антибиотикам та или иная бактерия устойчива. Это внесет вклад в решение проблемы антибиотикорезистентности, которая является одной из основных в современной медицине.
Наш партнер
-
АО "Р-Фарм"Группа компаний «Р-Фарм» предлагает комплексные решения для системы здравоохранения, специализируясь на исследованиях, разработке, производстве лекарственных средств, лабораторного оборудования и медицинской техники. Миссия «Р-Фарм» — сделать инновационные методы защиты здоровья более доступными для России и всего мира.